人纖維肉瘤細胞HT-1080的形態(tài)學觀察及鑒定：細胞換液后直接在倒置顯微鏡下觀察細胞的形態(tài)及生長特征，并作相差攝影，同時進行常規(guī)HE染色觀察并攝片。鑒定采用DAB免疫組織化學法，在6孔培養(yǎng)板中放置載玻片，在玻片上植入2ml含有1×106的細胞懸液，待細胞貼壁后，取出載玻片，放入-20℃的冷丙酮中固定30min,用PBS沖洗3次，每次2min,滴加3%H2O2室溫孵育10min，PBS沖洗3次，每次2min,以消除內(nèi)源性過氧化物酶的活性。滴加兔抗人Ⅷ因子相關(guān)抗原多抗工作液，放入濕盒內(nèi)4℃過夜，同時另一蓋玻片不加一抗作陰性對照。次日，用PBS沖洗3次，每次2min,滴加辣根酶標記的羊抗兔IgG,37℃孵育30min,用PBS沖洗3次，每次2min,用DAB底物混合工作液顯色，顯微鏡下觀察，待出現(xiàn)特異性染色后，終止顯色，進行復染，脫水，透明，封片，相差顯微鏡下觀察攝影。
人纖維肉瘤細胞HT-1080的培養(yǎng)：
1.取出小鼠后瀝干酒精，放入超凈臺內(nèi)，固定在泡沫板上。
2.用鑷子提起皮膚，用解剖剪剪開皮膚一個橫切口，將皮膚向上撕開，然后剪開肌肉等，暴露出腹腔，在左側(cè)找到脾臟，用彎頭YK鑷取出脾臟，置于無菌培養(yǎng)皿中。
3.用生理鹽水將取出的脾臟清洗多次，并剔除多余無用的組織。
4.將篩網(wǎng)置于平皿中，脾臟置于篩網(wǎng)上，用彎頭鑷鑷住，輕輕在篩網(wǎng)上進行碾磨，同時不停滴加不含血清的培養(yǎng)液沖洗。
5.將碾磨好的細胞懸液吸入至離心管中，離心(1000rpm，5min)，吸去上清（去除血液等）。
6.加入10ml培養(yǎng)液，吹打混勻，取樣計數(shù)。
7.將稀釋好的細胞懸液分裝于培養(yǎng)瓶中，輕輕搖晃混勻，在培養(yǎng)瓶上。
